一、項(xiàng)目基本情況

項(xiàng)目名稱：技術(shù)測(cè)試與分析服務(wù)

采購(gòu)方式：競(jìng)爭(zhēng)性談判

預(yù)算金額：9.5萬(wàn)元（人民幣）

最高限價(jià)（如有）：9.5萬(wàn)元（人民幣）

采購(gòu)需求：詳見(jiàn)附件

合同履行期限：/

本項(xiàng)目( 不接受 )聯(lián)合體投標(biāo)。

二、申請(qǐng)人的資格要求：

1.滿足《****政府采購(gòu)法》第二十二條規(guī)定；

2.本項(xiàng)目的要求：（1）熟悉了解我站水生動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)、病原菌耐藥性普查等工作。（2）供應(yīng)商須提交以下資質(zhì)證明文件：①供應(yīng)商須在中華人民**國(guó)境內(nèi)注冊(cè)，具有獨(dú)立法人資格，并提供合格有效的法人營(yíng)業(yè)執(zhí)照副本復(fù)印件、稅務(wù)登記證副本復(fù)印件、組織機(jī)構(gòu)代碼證副本復(fù)印件。若已三證合一的企業(yè)可只提供營(yíng)業(yè)執(zhí)照副本復(fù)印件。②提交項(xiàng)目報(bào)價(jià)單。③具有采購(gòu)服務(wù)內(nèi)容的技術(shù)服務(wù)、開發(fā)等資質(zhì)證明文件。

三、響應(yīng)文件提交

截止時(shí)間：2023年7月2日 17點(diǎn)30分（**時(shí)間）

地點(diǎn)：****（**省**市**區(qū)西洪路555號(hào)****五樓辦公室）

四、開啟

時(shí)間：2023年7月3日 10點(diǎn)00分（**時(shí)間）

地點(diǎn)：****（**省**市**區(qū)西洪路555號(hào)****四樓會(huì)議室）

五、公告期限

自本公告發(fā)布之日起5天。

六、其他補(bǔ)充事宜

無(wú)

七、凡對(duì)本次采購(gòu)提出詢問(wèn)，請(qǐng)按以下方式聯(lián)系。

名 稱：****

地址：**省**市**區(qū)西洪路555號(hào)

聯(lián)系方式：陳先生 0591-****0919

****

2023年6月27日

附件

一、采購(gòu)需求

序 號(hào) 內(nèi) 容 規(guī) 格 數(shù) 量

1 DNA測(cè)序,PCR測(cè)序 RXN 3000

2 高通量全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序 TEST 2

3 DNA合成,HAP合成11-25個(gè)堿基 2OD BP 2000

4 DNA合成,PAGE合成11-25個(gè)堿基 2OD BP 4000

5 DNA合成,5`端修飾 2OD PCS 2

6 DNA合成,雙標(biāo)記修飾 2OD PCS 20

7 ELISA保證型多克隆抗體制備服務(wù) Tex 1

8 Western blot保證型單克隆抗體制備服務(wù) Tex 1

9 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)服務(wù) Tex 1

10 細(xì)胞增殖檢測(cè)，MTT/CCK-8 EA 1

11 細(xì)胞凋亡檢測(cè)，TUNEL法 EA 1

二、服務(wù)內(nèi)容、形式和要求

1.服務(wù)內(nèi)容

1.1 測(cè)序：包括PCR產(chǎn)物、菌液和質(zhì)粒測(cè)序服務(wù)。

1.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序：對(duì)甲方提供的樣品進(jìn)行RNA提取，通過(guò)電泳檢測(cè)RNA質(zhì)量，合格后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建，用illumina平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序，讀長(zhǎng)方式：2×150bp ；每個(gè)樣品數(shù)據(jù)量：6G。

1.3 引物合成：包括普通PCR引物合成（PAGE純化，堿基范圍11～59bp，規(guī)格1～4OD）；熒光定量PCR引物合成（HPLC純化，堿基范圍11～59bp，規(guī)格2OD）；引物修飾（熒光標(biāo)記）（規(guī)格2OD，包括5',3'FAM、5'HEX、5'TET、5',3'Cy3、5',3'Cy5、3'BHQ1 / 3'BHQ2等標(biāo)記）；引物修飾（兩端DNA修飾探針）（規(guī)格2OD，包括5'FAM 3'BHQ1、5'ROX 3'BHQ2、5'Cy5 3'BHQ2、5'HEX 3'BHQ1、5'TET 3'BHQ1、5'TET 3'TAMRA、5'JOE 3'BHQ1、5'VIC 3'BHQ1等標(biāo)記）。

1.4 抗體制備：ELISA效價(jià)保證多抗制備，免疫2只新西蘭大白兔，血清采集及protein A純化，抗體ELISA檢測(cè)：效價(jià)>1:64000；Western blot保證型單克隆抗體制備服務(wù)，免疫1-5只Balb/c小鼠，免疫小鼠血清檢測(cè)：ELISA、Dot blot或Western blot，細(xì)胞融合，雜交瘤制備及鑒定，腹水生產(chǎn)及純化（1株雜交瘤）。

1.5 免疫學(xué)分析：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）將已知抗原或抗體吸附在固相載體上，通過(guò)抗原抗體特異性結(jié)合吸附待測(cè)樣品中的抗體或抗原后，加酶標(biāo)抗體（酶與抗體或抗原結(jié)合后，既不改變抗體或抗原免疫反應(yīng)的特異性，又不影響酶本身活性）和底物后，在相應(yīng)酶底物的作用下生成有色物質(zhì)，其顏色深淺與標(biāo)記物中相應(yīng)的抗體或抗原的含量呈正比，由此可測(cè)定抗原或抗體的含量。

1.6 細(xì)胞分析：采用TUNEL進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)，對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核進(jìn)行原位染色，準(zhǔn)確地反應(yīng)細(xì)胞凋亡典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)測(cè)定，檢測(cè)出極少量的凋亡細(xì)胞；采用MTT法進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)，四甲基偶氮唑鹽（MTT）作為哺乳類動(dòng)物細(xì)胞線粒體中琥珀酸脫氫酶的底物。當(dāng)有活細(xì)胞存在時(shí)，線粒體內(nèi)琥珀酸脫氫酶可將淡黃色的MTT還原成藍(lán)紫色的針狀甲瓚（Formazan）結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，結(jié)晶物能被二甲基亞砜（DMSO）溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度OD值，OD值的高低可間接反映活細(xì)胞的數(shù)量及其活性。

2. 服務(wù)形式和要求

2.1 測(cè)序

乙方向甲方可提供質(zhì)粒、菌液、PCR產(chǎn)物測(cè)序服務(wù)，服務(wù)周期12小時(shí)-48小時(shí)并提交測(cè)序數(shù)據(jù)給甲方，乙方保證每次正常的3730測(cè)序反應(yīng)能讀取不少于800堿基，若出現(xiàn)以下情況的乙方按對(duì)應(yīng)的處理方案解決。

1）對(duì)由于甲方樣品本身的原因(如GC rich、連續(xù)單一重復(fù)堿基Poly(A)、Poly(T)及其它特殊結(jié)構(gòu)等造成測(cè)序反應(yīng)終止或信號(hào)驟降，如待測(cè)樣品中存在不只一個(gè)測(cè)序引物的結(jié)合位點(diǎn)而造成套峰現(xiàn)象等)造成測(cè)序失敗或不能讀到800堿基的測(cè)序反應(yīng)，乙方仍然正常收費(fèi)；

2）如遇到信號(hào)衰減的情況，乙方保證調(diào)整反應(yīng)條件再測(cè)一次，如測(cè)序結(jié)果沒(méi)有好轉(zhuǎn)，則兩次按一次收費(fèi)，如正常則對(duì)正常的一次收費(fèi)；

3）對(duì)于不知原因的測(cè)序反應(yīng)沒(méi)有信號(hào)的樣品，乙方會(huì)至少進(jìn)行兩次實(shí)驗(yàn)，如果仍然失敗,乙方會(huì)終止實(shí)驗(yàn)并通知甲方，不收費(fèi)，甲方可以重新送樣測(cè)序；

4）如遇無(wú)法判斷的原因?qū)е聼o(wú)法正確讀取所承諾的測(cè)序長(zhǎng)度，雙方**協(xié)商解決。

2.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

1）乙方對(duì)樣品質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)樣品進(jìn)行電泳膠圖、紫外分析儀定量，如有問(wèn)題將與甲方及時(shí)溝通并協(xié)商樣品處理事宜；

2）乙方對(duì)檢測(cè)合格的樣品進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建；

3）對(duì)處理完成的樣品進(jìn)行文庫(kù)質(zhì)檢與定量混合；

4）對(duì)樣品進(jìn)行高通量測(cè)序；

5）對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析；

6）交付完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告及原始數(shù)據(jù)。

2.3 引物合成

1）乙方按甲方要求提供的引物序列，為甲方合成引物并按要求提供引物實(shí)物及相應(yīng)的包裝，合成過(guò)程中雙方不可隨意更改引物序列。乙方收到甲方引物序列之日起，普通PCR引物合成則1-2個(gè)工作日內(nèi)交貨給甲方；熒光定量PCR引物合成、熒光標(biāo)記、兩端DNA修飾探針則4-5個(gè)工作日內(nèi)交貨給甲方，同時(shí)乙方向甲方提供其在完成引物合成過(guò)程中的實(shí)驗(yàn)報(bào)告及全部數(shù)據(jù)資料；

2）乙方保證合成質(zhì)量，合成序列準(zhǔn)確、純度合格。如果遇到甲方使用期間有任何問(wèn)題，經(jīng)過(guò)乙方核實(shí)，乙方將免費(fèi)重新合成一次，但不承擔(dān)額外補(bǔ)償。

2.4 抗體制備

1）根據(jù)甲方提供抗原信息（可提供抗原序列信息或NCBI登錄號(hào)）或抗原蛋白進(jìn)行ELISA效價(jià)保證多抗制備，交付300μl免疫前血清、剩余裸肽或蛋白、2mg以上純化后抗體（來(lái)源于1只兔子），以及完整的項(xiàng)目結(jié)題報(bào)告和免疫原的ELISA驗(yàn)證結(jié)果；

2）根據(jù)甲方提供的抗原及 抗體制備信息采集表進(jìn)行免疫原western blot保證型，交付1株雜交瘤細(xì)胞；2mg抗體（1株雜交瘤細(xì)胞）以及完整的項(xiàng)目結(jié)題報(bào)告和免疫原的WB驗(yàn)證結(jié)果。

2.5 免疫學(xué)分析

1）乙方根據(jù)甲方提供樣品及樣本信息表中甲方填寫的內(nèi)容進(jìn)行樣品的上樣做酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)服務(wù)，甲方如有特殊代測(cè)要求需在”樣本信息表”中備注；

2）甲方需提供樣品。乙方代測(cè)之后提供客觀真實(shí)的電子版代測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果，如有跟甲方預(yù)期結(jié)果不一致之處，乙方不承擔(dān)相關(guān)責(zé)任。

3）若實(shí)驗(yàn)進(jìn)展得不順利，乙方應(yīng)及時(shí)和甲方溝通，由雙方協(xié)商實(shí)驗(yàn)進(jìn)行一些調(diào)整（延時(shí)或者更改實(shí)驗(yàn)方案）；

4）實(shí)驗(yàn)完成后，乙方將實(shí)驗(yàn)結(jié)果、原始數(shù)據(jù)等材料通過(guò)電子郵件形式發(fā)送甲方，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的問(wèn)題甲乙雙方**協(xié)商。

2.6 細(xì)胞分析

1）乙方根據(jù)甲方提供樣品及樣本信息表中甲方填寫的內(nèi)容進(jìn)行TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)；

2）乙方對(duì)甲方所做項(xiàng)目的內(nèi)容承擔(dān)保密義務(wù)，未經(jīng)甲方書面許可，不得泄露或者私自將數(shù)據(jù)結(jié)果轉(zhuǎn)讓他人，****機(jī)關(guān)或有權(quán)機(jī)構(gòu)要求除外；

3）乙方會(huì)慎重對(duì)待甲方提供的樣品，但對(duì)于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的樣品損耗（包括實(shí)驗(yàn)失敗造成的樣品損耗），乙方不承擔(dān)賠償責(zé)任。